SERODIAGNÓSTICO DE LA TOXOPLASMOSIS POR HEMOAGLUTINACIÓN INDIRECTA

OBJETIVO

Aprender a realizar una determinación cuantitativa de anticuerpos séricos dirigidos contra toxoplasma gondii por hemoaglutinación indirecta.

FUNDAMENTO

Los hematíes sensibilizados están constituidos por hematíes de ovino recubiertos por un antígeno toxoplasmático. Esta técnica permite detectar las IgG y las IgM anti-toxoplasmáticas. 

La presencia de anticuerpos anti-toxoplasma gondii séricos provoca aglutinación de los hematíes sensibilizados que se traduce en un velo rojo/marrón rojo.
En ausencia de Ac específicos , estos hematíes sedimentan en el fondo del pocillo formando un anillo.

Los hematíes no sensibilizados aseguran la especificidad de la reacción y permiten eliminar las interferencias debidas a las aglutininas naturales anti-ovino (heteroanticuerpos de Forssman, Ac de mononucleosis infecciosa)

COMPOSICIÓN DEL EQUIPO

• Hematíes sensibilizados (origen animal)
• Hematíes no sensibilizados (origen animal)
• Tampón fosfato pH 7,2
• Control positivo titulado (origen animal)
• Control negativo (origen animal)

MATERIAL NO SUMINISTRADO

• 2 microplacas en forma de U por grupo
• Micropipeta y puntas
• Vaso de desechos
• Tubos de ensayo y tapones

PRECAUCIONES DE USO

Agitar cuidadosamente las suspensiones de hematíes antes del uso.

PROCEDIMIENTO

1. Lo primero que vamos a hacer es preparar una dilución madre del suero a analizar (1/40). Para ello depositamos en un tubo de ensayo con una pipeta 1,95 mL de tampón fosfato y 50 uL de suero.
2. Seguidamente suspendimos en una placa microtiter 50 uL de tampón fosfato en 8 pocillos de la microplaca.
3. Dispensar 50 uL de la dilución madre en el primer pocillo y transferimos hasta el sexto, desechando el volumen de paso de este. Es decir, realizamos una batería de dilución.
4. Tras ello dispensamos 50 uL de dilución madre en el séptimo pocillo y mezclamos con el tampón, luego desechamos 50 uL. Esto se realiza como suero control, el cual tiene el objetivo de detectar aglutininas naturales anti-ovino (Ac de Forssman) que pueden contener ciertos sueros y ello nos llevaría a un falso positivo. En el caso de que salga positivo debemos tratar el suero con adsorbente y realizar de nuevo el mismo proceso descrito (aunque ese no fue el caso porque nos dio negativo)
5. Luego agitamos cuidadosamente las suspensiones de hematíes, en nuestro kit se designaban así:

• R1: Hematies sensibilizados
• R2: Hematies no sensibilizados
• R3: Adsorbente (que no usamos)

Tras la agitación lo que hicimos fue añadir R1 a los primeros 6 pocillos y al numero 8. El  pocillo ocho controla la validez del tampón y de los hematíes sensibilizados.

  

Luego añadimos R2 al pocillo 7 (el suero control).
Tras esto homogeneizamos de forma cuidadosa el contenido de los pocillos golpeando lateralmente la microplaca pero manteniendola plana.
Lo dejamos reposar 2 horas tapado con parafilm.

LECTURA DE LOS RESULTADOS

Observamos que los tres primeros pocillos no tenían anillo y los demás sí, por lo que el título de nuestra prueba sería 320.
Como no teníamos 2-ME no pudimos realizar la prueba con el reactivo por lo que no podemos comparar resultados y dar un resultado definitivo de la prueba.