DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE ANTICUERPOS ANTI-BRUCELLA

OBJETIVO

Aprender a hacer una determinación cualitativa de anticuerpos anti-Brucella mediante técnicas de aglutinación en porta.

FUNDAMENTO

El Rosa de Bengala es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de Ac anti-Brucela en suero humano. La suspensión bacteriana y coloreada, es aglutinada por Ac IgG o IgM presentes en el suero del paciente.

SIGNIFICADO CLÍNICO

El diagnostico de la brucelosis puede establecerse bien sea por el aislamiento del microorganismo en sangre o heces, o por la demostración de la presencia de Ac específicos en el suero del paciente, que es el que vamos a hacer en este caso. El reactivo, debido a su formulación en un tampón ácido, es capaz de reaccionar con IgG o IgM, por lo que es muy útil para el diagnostico de individuos en fase crónica de la enfermedad, los cuales presentan un nivel elevado de IgG difícilmente detectables por el método tradicional de aglutinación en tubo (Wright)

MATERIAL

• Micropipeta y puntas
• Vaso de desecho
• Tarjeta con fondo blanco
• Agua destilada

REACTIVOS

• Rosa de Bengala: suspensión de Brucella abortus cepa S99, en tampón lactato
• Control + (rojo): Suero animal, con Ac anti Brucella   >  50UI/mL 
• Control - (azul): Suero animal. Conservante.

MUESTRA

Como no teníamos suero, usamos el control + como muestra.

PROCEDIMIENTO

Método cualitativo

1. Depositamos 50 µL de control positivo y otro 50 µL de control negativo en círculos distintos del porta.
2. Agitamos el reactivo de rosa de bengala y añadimos una gota a cada círculo.
3. Mezclamos con una punta.
4. Agitamos el porta durante 4 minutos.
5. Observamos los resultados.

Método semicuantitativo

1. Realizamos diluciones dobles de la muestra en SSF. Para ello, añadimos 50 μL de solución salina fisiológica en cada círculo.
2. Añadimos 50 μL de muestra en el primer círculo.
3. Homogeneizamos y pasamos 50 μL al segundo círculo. Repetimos este paso hasta el último círculo que desechamos los 50 μL.
4. Añadimos una gota de rosa de bengala y mezclamos con una punta de pipeta para cada círculo.
5. Dejamos 4 minutos.
6. Observamos los resultados y vemos que solo ha aglutinado el primer círculo. Por lo que el título es 2.