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DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE INMUNOGLOBULINA M.

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OBJETIVO Manejar el espectrofotómetro para determinación de inmunoglobulinas por turbidimetría. FUNDAMENTO Los Ac anti - IgM forman compuestos insolubles cuando se combinan con IgM de la muestra del paciente, ocasionando un cambio en su absorbancia proporcional a la concentración de IgM en la muestra y que puede ser cuantificada por comparación con un calibrador de IgM de concentración conocida. La IgM es la única Ig que sintetiza el recién nacido. En adultos representa el 5-10% de Ig. Su concentración se halla disminuida en enfermedades relacionadas con deficiencias hereditarias o adquiridas de la producción de Ig. La IgM aumenta en infecciones víricas e infecciones del torrente circulatorio como la malaria. MATERIAL Gradilla Tubos de ensayo Micropipeta y puntas Baño termostático Espectrofotómetro Cubeta de espectrofotometría REACTIVOS Diluyente (R1) Anticuerpo (R2) Protein Cal PROCEDIMIENTO Preparamos primero una batería de diluciones y rotulam...
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DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE ANTICUERPOS FEBRILES. ANTÍGENOS BACTERIANOS

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OBJETIVO Aprender a realizar  la determinación semicuantitativa de Ac febriles por la demostración del título de Ac específicos, somáticos o flagelares en el suero del paciente. FUNDAMENTO Los Ag bacterianos son una técnica de aglutinación en porta y tubo para la detección y semicuantificación de Ac anti- Salmonella, Brucella y Proteus en suero humano. Los reactivos aglutinan en presencia del Ac homólogo correspondiente en las muestras ensayadas. Forma las bases del ensayo de Widal que establece que altos niveles de Ac O y H superiores a 1/100 en suero, es indicativo de infección por estos microorganismos. MATERIAL Gradilla Tubos de ensayo Micropipeta y puntas Estufa a 37ºC REACTIVOS Proteus Control +  Control - PROCEDIMIENTO Realizamos directamente el método semicuantitativo. Rotulamos los tubos con la dilución que llevarán. Con una micropipeta dispensamos en los 6 tubos 1 mL de solución salina y luego 0,9 mL de solución salina solo en el p...
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DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE ANTICUERPOS ANTI-TREPONEMA PALLIDUM

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OBJETIVO Aprender a llevar a cabo la  detección cualitativa y semicuantitativa indirecta en microplaca de Ac específicos anti-Treponema pallidum. FUNDAMENTO La sífilis es una enfermedad venérea provocada por la infección con T. pallidum. La transmisión de produce por contacto directo a través de una lesión productiva. Los Ac anti-Treponema aparecen a partir de la primera fase y pueden permanecer en un 85-90% de pacientes tratados a pesar de haber superado la enfermedad. MATERIAL Micropipeta y puntas Placa de microtiter REACTIVOS R1: Células Test (TC): Hematíes de ave estabilizados y sensibilizados con Ag de T.pallidum R2: Células Control (CC): Suspensión estabilizada de hematíes de ave R3: Diluyente: Tampón fosfato MUESTRA Suero PROCEDIMIENTO Método cualitativo En el primer pocillo de la primera fila colocamos 25 µL de muestra (que ya venía diluida al 1/20) y 75 µL de células test (R1) y homogeneizamos. En el segundo pocillo de la primera...
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DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE REAGINAS PLASMÁTICAS. RPR-CARBON

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OBJETIVO Aprender a d eterminar cualitativamente la presencia de reaginas plasmáticas en suero humano. FUNDAMENTO Es una técnica no treponémica de aglutinación para la detección cualitativa y semicuantitativa de reaginas plasmáticas presentes en suero humano. Las reaginas son grupo de anticuerpos dirigidos contra componentes del propio organismo, originadas en pacientes que sufren infección por Treponema pallidum, agente causal de las sífilis. Este microorganismo produce lesiones en el hígado y corazón, liberando al torrente circulatorio pequeños fragmentos de este órgano. MATERIAL Micropipetas y puntas Vaso para desechos Porta REACTIVOS RPR-carbon: partículas de carbón sensibilizadas con una mezcla de lípidos y colesterol, en tampón fosfato. Control + (tapón rojo): suero humano con una concentración de FR > 30 Ul/mL. Control - (tapón azul): suero animal. MUESTRA Control + PROCEDIMIENTO Homogeneizar PRP- carbón con suavidad antes de su uso. Se a...
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DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE ANTICUERPOS ANTI-BRUCELLA

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OBJETIVO Aprender a hacer una determinación cualitativa de anticuerpos anti-Brucella mediante técnicas de aglutinación en porta. FUNDAMENTO El Rosa de Bengala es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de Ac anti-Brucela en suero humano. La suspensión bacteriana y coloreada, es aglutinada por Ac IgG o IgM presentes en el suero del paciente. SIGNIFICADO CLÍNICO El diagnostico de la brucelosis puede establecerse bien sea por el aislamiento del microorganismo en sangre o heces, o por la demostración de la presencia de Ac específicos en el suero del paciente, que es el que vamos a hacer en este caso. El reactivo, debido a su formulación en un tampón ácido, es capaz de reaccionar con IgG o IgM, por lo que es muy útil para el diagnostico de individuos en fase crónica de la enfermedad, los cuales presentan un nivel elevado de IgG difícilmente detectables por el método tradicional de aglutinación en tubo (Wright) MATERIAL Micropipet...
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DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE ANTI-ESTREPTOLISINA O

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OBJETIVO Aprender a hacer una determinación cualitativa de la Proteína C-Reactiva mediante técnicas de aglutinación en porta. FUNDAMENTO El ASO-Látex es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de anti-estreptolisina O en suero humano. Las partículas de látex recubiertas con estreptolisina O son aglutinadas por anticuerpos ASO presentes en la muestra del paciente. MATERIAL Micropipetas y puntas Vaso para desechos Porta SSF REACTIVOS Látex: suspensión de partículas de látex recubiertas con SLO. Control + (tapón rojo): suero humano con una concentración de FR > 30 Ul/mL. Control - (tapón azul): suero animal. MUESTRA Al no disponer de suero usamos el control + como muestra. PROCEDIMIENTO Método cualitativo Depositamos 50 µL de control positivo y otros 50  µL de control negativo  sobre un círculo distinto.  Agitamos el reactivo de PCR- Látex y se deposita una gota sobre los cont...
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SERODIAGNÓSTICO DE LA TOXOPLASMOSIS POR HEMOAGLUTINACIÓN INDIRECTA

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OBJETIVO Aprender a realizar una determinación cuantitativa de anticuerpos séricos dirigidos contra toxoplasma gondii por hemoaglutinación indirecta. FUNDAMENTO Los hematíes sensibilizados están constituidos por hematíes de ovino recubiertos por un antígeno toxoplasmático. Esta técnica permite detectar las IgG y las IgM anti-toxoplasmáticas.  La presencia de anticuerpos anti-toxoplasma gondii séricos provoca aglutinación de los hematíes sensibilizados que se traduce en un velo rojo/marrón rojo. En ausencia de Ac específicos , estos hematíes sedimentan en el fondo del pocillo formando un anillo. Los hematíes no sensibilizados aseguran la especificidad de la reacción y permiten eliminar las interferencias debidas a las aglutininas naturales anti-ovino (heteroanticuerpos de Forssman, Ac de mononucleosis infecciosa) COMPOSICIÓN DEL EQUIPO Hematíes sensibilizados (origen animal) Hematíes no sensibilizados (origen animal) Tampón fosfato pH 7,2 Control positivo titulad...
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