DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE INMUNOGLOBULINA M.

OBJETIVO

Manejar el espectrofotómetro para determinación de inmunoglobulinas por turbidimetría.

FUNDAMENTO

Los Ac anti - IgM forman compuestos insolubles cuando se combinan con IgM de la muestra del paciente, ocasionando un cambio en su absorbancia proporcional a la concentración de IgM en la muestra y que puede ser cuantificada por comparación con un calibrador de IgM de concentración conocida.
La IgM es la única Ig que sintetiza el recién nacido. En adultos representa el 5-10% de Ig. Su concentración se halla disminuida en enfermedades relacionadas con deficiencias hereditarias o adquiridas de la producción de Ig. La IgM aumenta en infecciones víricas e infecciones del torrente circulatorio como la malaria.

MATERIAL


  • Gradilla
  • Tubos de ensayo
  • Micropipeta y puntas
  • Baño termostático
  • Espectrofotómetro
  • Cubeta de espectrofotometría

REACTIVOS


  • Diluyente (R1)
  • Anticuerpo (R2)
  • Protein Cal

PROCEDIMIENTO

Preparamos primero una batería de diluciones y rotulamos los tubos del 1 al 6 y dispensamos con la pipeta primero las siguientes cantidades de solución salina: 
  • Tubo 1 100 µL
  • Tubo 2: 90 µL
  • Tubo 3: 75 µL
  • Tubo 4: 50 µL
  • Tubo 5: 25 µL
  • Tubo 6: nada
Seguidamente añadimos el calibrador y homogeneizamos con las siguientes cantidades:
  • Tubo 1: sin calibrador
  • Tubo 2: 10 µL
  • Tubo 3: 25 µL
  • Tubo 4: 50 µL
  • Tubo 5: 75 µL
  • Tubo 6: 100µL
Finalmente, con el espectrofotómetro medimos la absorbancia de cada tubo.
Como el reactivo que usamos no dió un resultado correcto de las absorbancias, usamos la medida de otras compañeras.
  • Tubo 1: 0.214
  • Tubo 2: 0.219
  • Tubo 3: 0.224
  • Tubo 4: 0.251
  • Tubo 5: 0.275
  • Tubo 6: 0.289
Cogemos otros 6 tubos y los rotulamos y dispensamos en cada uno de ellos 800 µL de R1 y seguidamente del tubo 1 de la anterior se cogen 10 µL y se depositan en el tubo 1 de la batería nueva y así sucesivamente hasta el tubo 6. Es muy importante homogeneizar y cambiar de punta.
Volvemos a realizar las medidas de la absorbancia de cada tubo.
  • Tubo 1: 0.027
  • Tubo 2: 0.097
  • Tubo 3: 0.243
  • Tubo 4: 0.329
  • Tubo 5: 0.428
  • Tubo 6: 1.052

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